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生命科学和医疗设备

荧光成像
 

光学赋能荧光成像的光学元件

荧光成像是一种高灵敏度、非侵入性的强大技术,用于生命科学领域对活体/固定细胞、组织乃至完整生物体的生物过程进行可视化监测。荧光物质(如荧光染料/荧光团/发色团)受光或其他电磁辐射激发后发射可见或不可见辐射的现象现有多种高特异性荧光染料与蛋白质可用于生物结构标记荧光成像技术可分为光谱检测法与显微成像法两大类别。基于光谱检测的典型应用包括:定量PCR(qPCR)、DNA测序、高通量筛选、流式细胞术生物医学实验室常用荧光显微技术涵盖:宽场荧光显微术、共聚焦显微术、多光子显微术、全内反射荧光(TIRF)、超分辨显微术(SIM/STORM/PALM/STED)、光片显微术、荧光寿命成像最合适技术的选择取决于多个因素:二维/三维分辨率、成像速度、成像深度、所需色彩通道数量、所有技术均基于相同的荧光机制观测生物过程

标准荧光成像系统包含以下核心组件:

  • 激发光源:宽带光源、窄带光源(如LED或激光器)。
  • 光学组件:聚光元件:透镜组/反射镜/棱镜,分光元件:各类光学滤光片
  • 信号探测器:光电二极管、光电倍增管(PMT)、CCD/CMOS相机

荧光滤光片组在分离激发光与发射荧光方面具有关键作用,其标准配置包含三大核心元件:激发滤光片(通常为带通型),用以精准筛选特定波段的激发光。二向色镜(亦称分光镜),能高效反射激发光/透射发射荧光。发射滤光片(带通或长通型),具备的透射曲线需经优化匹配特定荧光团的光谱特性。

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血液和光学

荧光共聚焦显微镜 - 技术概述与典型光路

荧光显微技术是研究突触结构(如树突棘与轴突末梢)功能形态动态,以及解析神经环路连接与活动的核心方法。一般来说,光路中激光束经针孔聚焦形成点光源空间滤波后的光被二向色镜反射(视需配置光束扩展器以匹配物镜孔径)然后,物镜将激发能量聚焦到样品上,样品发出较弱的荧光信号,该信号由同一物镜收集。这些发射光通过二向色滤光片传输到次级物镜透镜,然后经过最后一个针孔,最终被CCD或CMOS传感器检测。理想情况下,两个针孔位于光轴上的共轭像平面,这样可以使图像在物体平面上完美重合。由于共聚焦显微镜观察的是物体平面上的一个非常薄小的点,因此通过扫描系统或电动执行器对光进行采样以收集一系列图像是非常重要的。这些图像随后被重建为2D或3D图像。

流式细胞术
图1:荧光显微镜基础滤光片配置

光学赋能的其他诊断技术

多种光学诊断技术被用于脑部等医学检测,包括:激光显微技术、光遗传学技术。

GFP

GFP绿色荧光蛋白是由特定氨基酸组成的特殊蛋白,在紫外/蓝光激发下发出绿色荧光。从海洋生物中提取的最常见激发波长为395nm到475nm,发射峰值范围为509nm到525nm。GFP广泛应用于无创荧光成像系统、肿瘤生长监测、细胞凋亡研究

光遗传学技术

通过光控技术操纵活体组织细胞(主要为经基因改造的神经元),多数情况下,是使用经过基因修饰的光敏受体、用特定波段光刺激。

CLARITY

基于水凝胶的脑组织透明化处理方法通过抗体或生物标志物的配合,可以确定并研究大脑的核结构的高度详细图像。

GCaMP

一种用于大脑成像的基因编码钙离子指示剂。GCaMP 类似于绿色荧光蛋白(GFP)、钙调蛋白和来自肌球蛋白的肽序列的融合体。

大脑映射

这种神经科学技术旨在通过空间表示来绘制和列出大脑神经元的特定数量或属性。换言之,通过成像技术可解析大脑、脊髓及中枢神经系统的解剖结构与功能特性。

膜片钳技术

一种用于研究神经元、心肌细胞、肌纤维等细胞单/多离子通道功能的电生理技术

激光显微镜

应用于脑切片中突触、神经元及神经环路研究的显微方法包括:荧光显微术、共聚焦显微术、多光子显微术、超分辨显微术。

诊断技术

产品聚焦

多元素物镜对于任何显微技术都至关重要,包括许多用于大脑诊断的技术。了解不同类型的物镜非常重要,以确保为您的应用选择正确的物镜。

  • 有限共轭
     
  • 无限远矫正
     
  • 反射式
     
  • 消色差
     
  • 复消色差
     
有限共轭物镜

有限共轭物镜

有限共轭物镜是无需辅助透镜即可对样本聚焦的显微镜物镜。这类物镜通常针对可见光谱优化设计,最多包含四片透镜组。

图2: 有限共轭物镜设计

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远场校正镜头

远场校正镜头

无限校正物镜是将焦点校正至无限远的显微镜物镜。它们具有较长的工作距离,并可在光路中插入光学透镜或滤光片等光学元件。无限校正物镜比有限共轭物镜具有更高的分辨率,但更重且更昂贵。

图3 (左):无限共轭(无限校正)显微镜设计

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了解Infinity校正后的目标解析倍率和放大率

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在无限校正物镜中使用套筒透镜

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反射物镜

反射物镜

反射物镜是显微镜物镜,在需要在广泛光谱范围内进行色度校正的显微镜应用中使用两个反射镜形成图像或聚焦激光。

图 4: 反射式物镜结构剖析

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反射式物镜简介

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要求严格的应用需要使用反射式物镜。

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消色差物镜

消色差物镜

消色差物镜是用于校正红色和蓝色波长的色差以及绿色波长的球形畸变的显微镜物镜。消色差物镜比复消色差物镜更轻,更便宜,但对色差,球面畸变和场平面度的校正不够多。

图 5: 复消色差(左)与消色差(右) 物镜设计

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复消色差物镜

复消色差物镜

复消色差物镜是显微镜物镜,在宽广的波长范围(VIS到NIR)上,其色彩校正优于消色差物镜,同时具有更好的球面校正和场平面度。然而,它们比消色差目标更重,更昂贵。

图 6: 复消色差(左)与消色差(右)客观设计

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荧光显微镜物镜带成像滤光片的透射照明

了解有关如何组装荧光显微镜系统的更多信息。

无限共轭系统套筒长度计算器

在无限共轭显微镜系统中,使用物镜焦距、物镜数值孔径(NA)、物镜透镜入瞳直径、物镜透镜焦距和传感器大小来确定覆盖特定图像传感器尺寸且不发生晕影的最大管长。

大脑疾病

以下是通过先进的诊断技术(如荧光显微镜)检测到的常见大脑疾病。显微镜物镜和其他光学组件的进步使得这些疾病的检测和治疗变得更加容易。

中风

这种医学状况是由大脑供血中断一段时间引起的,导致身体一侧的肌肉无力、面部控制丧失、麻木和语言障碍。

阿尔茨海默氏症

一种渐进性且无法治愈的痴呆类型,破坏记忆和其他重要的精神功能,起初缓慢发展,随着时间推移逐渐加重。

帕金森病

一种无法治愈的中枢神经系统(CNS)疾病,影响运动并包括无法控制的颤抖。

亨廷顿舞蹈症

一种遗传性、无法治愈的疾病,导致大脑中的神经细胞随着时间的推移逐渐退化,导致身体出现不自主的抽动,最终无法讲话。

脑膜炎

一种严重的脑和脊髓膜炎症,通常由感染引起,导致发热、头痛和颈部僵硬。

癫痫

一种以反复发作的癫痫为特征的疾病,主要由于大脑中异常和增加的电活动引起。

脑震荡

最常见的创伤性脑损伤类型,由强烈冲击引起,导致大脑在颅骨内震动或移动。

脑肿瘤

大脑中的癌性或良性异常细胞生长,具有各种严重程度和类型,包括星形胶质瘤、胚胎瘤、室管膜瘤和脑膜瘤。

 
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